培養基細胞實驗需要的環境和用到的器皿

培養基細胞在體外培養中所需的條件與體內細胞基本相同。

　　1、無污染環境

　　培養環境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當細胞放置于體外培養時，與體內相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質積累等，可導致細胞死亡。因此在進行培養中，保持細胞生存環境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。

　　2、恒定的溫度

　　維持培養基細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養的標準溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數有可能恢復；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復可能；當溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。

　　3、氣體環境

　　氣體是人體細胞培養基生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環，產生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養時一般把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

　　二氧化碳既是細胞代謝產物，也是細胞生長繁殖所需成分，它在細胞培養中的主要作用在于維持培養基的PH值。大多數細胞的適宜PH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細胞培養將產生有害的影響。但細胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環境中更利于細胞生長。有資料顯示，原代羊水細胞培養PH6.8時zui適。

　　細胞培養液PH濃度的調節zui常用的為加NaHCO3的方法，因為NaHCO3可供CO2，但二氧易于逸出，故zui適用于封閉培養，而輕乙基哌嗪乙硫磺酸（HEPES）因其對細胞無毒性，也起緩沖作用，有防止PH迅速變動的特性而用于開放細胞培養技術中，其zui大優點是在開放式培養或細胞觀察時能維持較恒定的PH值。

    細胞培養基以玻璃器皿為主，常準備zui需是使用zui的三倍。器皿應選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面幾種。

　　（1）液體儲存瓶：用于儲存各種配制好的培養液、血清等液體，常以500ml、250ml、100ml生理鹽水瓶或血漿瓶代替。

　?。?）培養瓶：根據培養細胞種類要求不同培養瓶的形態各異，用于細胞傳代培養的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內任何部位，規格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。用于外周血培養的常用10ml普通圓瓶。兩種培養瓶均要求選用玻璃制成。

　　（3）培養基皿：用于開放式培養及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm等幾種。

　?。?）吸管：常用的有長吸管和短吸管兩類，長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用于移動液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。

　?。?）離心管：離心管是細胞培養中使用zui廣泛的器皿，根據用途不同形態各樣，常用于細胞培養的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml、30ml、15ml；后者則多為10ml和5ml。

　　（6）其它：如三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等。